冬凌草为唇形科（Labiatae）植物碎米桠Rabdosia rubescens (Hemsl.)Hara的干燥地上部分。又名碎米桠、冰凌草、破血丹等，广泛分布于黄河流域及以南的广大地区，以河南省为主产地。小灌木，高30～100 cm。生于山坡、灌丛、林地及路边等向阳处，海拔100～2 800 m[1]。《中国药典》记载其味苦甘，性微寒；有清热解毒、活血止痛的功用。在河南民间常用于治疗急、慢性咽炎，支气管炎、扁桃体炎等炎症和虫蛇咬伤[2]。

现代研究表明冬凌草中主要含有二萜类化合物[3-8]，尤其是以冬凌草甲素为代表的对映贝壳杉烷型二萜表现出较强的抗肿瘤活性[8-17]。本实验首次对冬凌草的CO2超临界提取物进行分离纯化，从中得到1个新的黄烷类化合物，鉴定为3′-羟基-2′,4′-二甲氧基-3-烯-黄烷（3′-hydroxy-2′,4′-dimethoxy- flav-3-ene，1），命名为冬凌烷A。

1  仪器和材料

SPE 24×2-(32) 超临界萃取装置，紫外/可见光谱仪JASCO V-550；红外光谱仪JASCO FI/IR-480 Plus FourierTransform；BRUKER AV-400型（瑞士Bruker公司）；LC-6AD半制备液相色谱仪（岛津企业管理有限公司）；1290超高效液相色谱仪（美国安捷伦科技公司）；COSMOSIL PACKED COLUMN 5PYE（250 mm×10 mm，Nacalai Tesque公司）；6540四级杆串联飞行时间质谱（美国安捷伦科技公司），KQ5200B型超声波清洗器（广州浩瀚仪器有限公司）；电子分析天平[梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司]。

ODS（日本YMC公司生产）；MCI GELCHP20P（三菱化学公司）柱色谱色谱与薄层色谱用硅胶（均由青岛海洋化工厂生产）；色谱级乙腈（美国默克公司）；色谱级甲醇（山东禹王公司产品）；所有分析试剂均来自天津大茂公司产品。

冬凌草购于安徽普仁中药饮片有限公司，产地河南；生产批号151112；生产日期2015年11月12日，生产许可证号：皖20130318。经广东药科大学刘基柱副教授鉴定为碎米桠Rabdosia rubescens (Hemsl.) Hara的干燥地上部分，样本现保存于广州中医药大学国际中医药转化医学研究所。

2  提取与分离

将14.0 kg干燥冬凌草粉碎，过20目筛，以料液比1∶1.5的配比加入夹带剂（90%乙醇水）21.0 L，充分混匀。然后采用SPE 24×2-(32) 超临界萃取装置进行CO2萃取，提取条件：压力30 MPa，提取温度50 ℃，提取时间为3 h。50 ℃下减压浓缩提取液，得到粗浸膏445.16 g。

取423.19 g浸膏经硅胶柱色谱，先以石油醚-醋酸乙酯（200∶1→5∶1）梯度洗脱，然后以100%甲醇洗脱，得到4个流分Fr. A～D。Fr. B（59.3 g）先经MCI柱色谱（甲醇-水70%～100%洗脱），得到Fr. B1～B4，将Fr. B1（1.79 g）经ODS开放柱色谱，甲醇-水（70%～100%）洗脱，得到Fr. B1-1～B1-5，Fr. B1-2再经制备型HPLC（甲醇-水73%～27%洗脱）得到化合物1（5.5 mg）。

3  结构鉴定

化合物1：白色无定形粉末，易溶于氯仿，薄层色谱展开后喷10%浓硫酸乙醇，显墨绿色。HR- ESI-MS m/z: 285.111 3 [M＋H]+（计算值285.112 7，C17H17O4），提示化合物1的分子式为C17H16O4。(nm):204；(cm−1): 3 347, 2 941,   1 725, 1 609,1 485, 1 286, 1 222, 1 092，提示该化合物含有苯环和羟基。旋光数据为[α]25D +1.1°(c 0.1, CH3OH)。

化合物1的1H-NMR谱（表1）中显示1组邻位芳香环质子信号δH 6.62 (1H, d, J = 8.6 Hz, H-5′),6.96(1H, d, J = 8.6 Hz, H-6′)，存在1个四取代苯环。1H-NMR谱中还显示有4个芳香环质子信号δH 7.08 (1H, t, J = 7.7 Hz,H-7), 7.00 (1H, d, J = 7.4 Hz, H-5), 6.85(1H, t, J = 7.4 Hz, H-6), 6.74 (1H,d, J = 8.0 Hz, H-8)，根据峰的裂分和偶合常数表明这4个氢质子信号组成了ABCD自旋体系，为1个邻位二取代的苯环，同时在1H-1H COSY谱中能观察到这4个氢质子信号依次有相关。另外1H-NMR谱显示1组自旋偶合体系δH 6.54 (1H, d, J = 9.8 Hz,H-4), 6.24 (1H, brs, H-2), 5.75 (1H, dd, J= 9.8, 3.1 Hz, H-3)，提示存在1个环内顺式双键，同时在1H-1H COSY谱（图1）中能观察到这3个氢质子信号依次有相关。此外，1H-NMR谱中还显示了1个羟基氢质子信号δH 5.56 (s, 1H, 3-OH)、2个甲氧基信号δH 3.98 (3H, s, 2′-OMe), 3.87 (3H, s, 4′-OMe)，HSQC谱上显示没有碳信号与羟基质子直接相连。13C-NMR谱中共显示17个碳信号，包括12个芳香碳信号、2个烯碳信号、1个连氧碳信号δC71.6、2个甲氧基碳信号δC61.6和56.3。

HMBC谱（图1）显示δH 5.56 (OH) 与δC144.8(C-2′)、δC138.7 (C-3′) 和δC148.0 (C-4′) 均有相关，δH 3.98 (2′-OCH3) 与δC144.8 (C-3′) 相关，δH 3.87 (4′-OCH3) 与δC 148.0 (C-4′) 相关，提示2个甲氧基和羟基分别取代在2′、4′和3′位。HMBC谱还显示δH 6.54 (H-4) 和δH 6.96 (H-6′) 都与δC71.6 (C-2) 有相关，表明双键处于3、4位，B芳环取代在2位。其余H-4与C-5和C-9相关，H-8与C-6和C-9相关，H-6′与C-2′和C-4′相关，进一步证实了化合物1的结构。由于C-2存在手性中心，根据旋光值与圆二色光谱测试结果，提示该化合物为1对对映异构体，即为外消旋体。

综上，确定化合物1为3′-hydroxy-2′,4′- dimethoxy-flav-3-ene，1个新的黄烷类化合物，命名为冬凌烷A。

参考文献（略） 

来  源：张彦焘，雷  翔，王红刚，吴  鹏. 冬凌草中1个新的黄烷类化合物 [J]. 中草药, 2019, 50(12):2791-2793.