摘要

 

哮喘是一种复杂的气道炎症性疾病，针刺疗法是目前国内治疗哮喘的有效方法之一。本研究旨在探讨针刺对卵白蛋白(OVA)诱导的哮喘小鼠气道炎症及下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA)活性的调节作用。结果表明，针刺能有效地抑制气道高反应性(AHR)，抑制支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数、中性粒细胞、淋巴细胞和嗜酸性粒细胞计数，减轻气道炎症，减少TNF-、IL-1、IL-5和趋化因子的分泌。针刺还能调节HPA轴的活动，包括促进血浆促肾上腺皮质激素和皮质醇的分泌。提示针刺可减轻OVA诱导的小鼠哮喘模型气道炎症，调节hpa轴和免疫功能，为更好地了解针刺对哮喘气道炎症和hpa轴活动的调节作用提供了支持。

 

 

哮喘是一种慢性炎症性疾病，影响全世界3亿人[1]。气道高反应性(AHR)和慢性气道炎症是哮喘的两个重要特征，并与哮喘的发生发展密切相关。遗传和环境因素可能都参与了哮喘的发病机制[2]，这使得哮喘的复杂性和异质性变得更加复杂，而后者又给哮喘的临床管理和研究带来了挑战[3]。<br/>吸入糖皮质激素(ICS)和肾上腺素受体激动剂在缓解哮喘的炎症和控制症状方面有显著效果[4]，大多数哮喘患者对ICS和肾上腺素受体激动剂的治疗效果良好。<br/>然而，哮喘患者可能会出现诸如易擦伤、骨质疏松、白内障、青光眼和肾上腺抑制等副作用。针灸治疗哮喘历史悠久，疗效肯定，在我国临床上得到广泛应用。以前的研究已经证实，针灸有可能调节哮喘的基因表达谱，包括免疫反应和类固醇激素相关的通路[5]。此外，针灸被认为通过协调或平衡通过身体的能量和血液流动而引起深刻的心理物理反应[6]。下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴被认为是一个中枢综合系统，在机体对应激的成功生理适应中起着关键作用[7]，而HPA轴的激活与哮喘的发病[7，8]有关。HPA轴的激活涉及下丘脑室旁核释放促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)，刺激垂体前叶促肾上腺皮质激素(ACTH)的产生。外周循环中分泌的ACTH刺激肾上腺皮质，释放糖皮质激素，特别是皮质醇进入血液[9，10]。众所周知，糖皮质激素通过对CRH和ACTH分泌的负反馈而抑制HPA轴的活动[11]。然而，有关针刺调节HPA轴的资料尚不多见，而针刺对OVA诱发的小鼠哮喘模型中HPA轴的潜在作用尚未有深入的研究。本研究旨在探讨针刺对卵白蛋白(OVA)诱导的小鼠哮喘模型气道炎症及HPA轴活性的影响。

材料和方法

 

1、动物 ：雌性BALB/c小鼠

2、试剂：卵蛋白(OVA)、氢氧化铝(Al(OH)3)、戊巴比妥钠和乙酰甲胆碱(MCH)，促肾上腺皮质激素(ACTH)和皮质醇(CORT)ELISA试剂盒，炎症细胞因子Bio-Plex试剂盒，无菌针(长13 mm，直径0.25 mm)，Trizol试剂盒、SYBR Green试剂盒和Revertaid TM First Strand cDNA合成试剂盒。

3、哮喘模型建立及针灸治疗：将40只小鼠随机分为4组(每组10只)，即正常对照组(NC)、OVA诱发哮喘组(A组)、哮喘模型结合针刺治疗组(AA组)和哮喘模型+假针灸治疗组(ASA组)。用多种卵白蛋白致敏和激发建立小鼠哮喘模型。如图1所示，小鼠在第0天和第7天腹腔注射20g OVA和2MgAl(OH)3，0.2ml生理盐水中致敏。从第14天到第40天，以3%(w/v)卵清白蛋白溶液使小鼠吸入，每隔一天一次，每次30min，共4周。针灸方面选择对肺有调节作用的大椎、双侧肾俞、双侧肺俞作为治疗穴位进行操作。又选择于肺无直接关系的环跳穴进行假针治疗。

4、气道高反应治疗

5、肺组织苏木精-伊红染色

6、支气管肺泡灌洗液中炎症细胞计数：用0.3ml无菌PBS液(总量0.6ml)经气管插管灌洗左肺，500g离心10min，再用100 l PBS液作炎症细胞计数。

7、炎症细胞因子与HPA轴活性测定：采用Bio-Plex 2200全自动生化分析仪测定血清中细胞炎性因子TNF-、IL-1、IL-5和Eotaxin水平。

8、实时定量PCR分析

 

 

结果

 

针刺对ova诱导的小鼠哮喘模型AHR有抑制作用

AHR对MCH（每个红细胞内所含血红蛋白的平均量）的测定结果表明，MCH刺激引起RL（气道阻力）显著升高，Cdyn（肺顺应性）显著降低(图2，p<0.05或p<0.01)。针刺4周后，RL明显降低，Cdyn明显升高(图2，p<0.05或p<0.01)。但假针刺对AHR无明显改善作用(图2，p>0.05)。随着MCH剂量的增加，AHR加重更明显，针刺对AHR的改善效果更好。针刺组与假针刺组相比，对AHR的抑制作用有显著性差异。

 

 

观察各组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎症细胞的变化。测定总白细胞(Total)、中性粒细胞(Neu)、淋巴细胞(Lym)和嗜酸性粒细胞(Eos)，发现这些细胞类型均明显高于NC组(图4，p<0.01或p<0.05)。针刺治疗组小鼠的这些细胞数明显减少(图4，p<0.05)。而假针刺组大鼠白细胞总数、Neu细胞和Lym细胞数均无明显下降(图4，p>0.05)。此外，ASA组小鼠的EOS低于A组小鼠。

 

针刺抑制ova诱导的小鼠哮喘模型炎症细胞因子的分泌：观察针刺对各组小鼠血清炎性细胞因子的影响。OVA诱导的小鼠哮喘组和ASA组的TNF-、IL-1、IL-5和Eotaxin均显著高于NC组(图5，p<0.01或p<0.05)。针刺对这些炎性细胞因子有抑制作用(图5，p<0.05)。尤其是针刺对TNF-和IL-1的抑制作用明显优于假针刺(图5，p<0.05)。

 

针刺调节大鼠哮喘模型HPA轴功能：为了确定针刺在HPA轴功能中的作用，评估了下丘脑CRH mRNA的表达以及血浆中ACTH（促肾上腺皮质激素）和CORT（皮质醇）水平。OVA诱导的哮喘模型小鼠下丘脑CRHmRNA表达与NC组比较无显著性差异(图6A，p>0.05)。然而，与A组相比，针刺诱导CRHmRNA表达显著升高(图6A，p<0.01)，而假针刺未产生这种作用(图6A，p>0.05)。与NC组相比，A组和ASA组小鼠ACTH水平降低(图6B，p<0.05)，CORT水平升高(图6C，p<0.05)。针刺诱导的ACTH(图6B，p<0.05)和CORT(图6C，p<0.05)水平明显高于OVA诱导的哮喘模型。针刺对促肾上腺皮质激素(ACTH)和皮质醇(CORT)水平的影响显著高于假针刺(P<0.05)。

综上所述，本研究表明针刺对OVA诱导的小鼠哮喘模型气道炎症的减轻和HPA轴功能的调节具有重要作用，为进一步了解针刺对哮喘气道炎症和HPA轴活动的调节作用提供了支持。

文章来源：Wei Y, Dong M, Zhong L, et al. Regulation of hypothalamic-pituitary-adrenal axis activity and immunologic function contributed to the anti-inflammatory effect of acupuncture in the OVA-induced murine asthma model[J]. Neurosci Lett, 2017,636:177-183.