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热休克蛋白70和β-内啡肽介导的大鼠刺络放血拔罐疗法镇痛机制研究
来源:针灸读书会 2018-07-17 [医疗] [医疗资讯]
刺络放血拔罐疗法是疼痛管理的补充疗法。然而,这种疗法的机制需要进一步阐明。刺络放血拔罐疗法损伤的细胞似乎刺激热休克蛋白70(HSP70)的表达。其在疼痛减轻中的益处可以由β-内啡肽的表达介导。本研究旨在确定刺络放血拔罐疗法后HSP70与β-内啡肽的相关性。

实验方法

 

将16只雄性Wistar大鼠分为对照组(CG; n = 8)和治疗组(TG; n = 8)。两组大鼠在足垫处注射完全弗氏佐剂(CFA)。在TG中,CFA注射后48小时,在左,右侧椎旁区域进行刺络放血拔罐疗法。治疗后24小时,进行热板测试以评估疼痛阈值。之后,针对HSP70和β-内啡肽进行来自进行刺络放血拔罐疗法的皮肤免疫组织化学。

 

实验结果

 

     热休克蛋白70和β-内啡肽的表达

图1.免疫组化显示热休克蛋白70(HSP70)和β-内啡肽在大鼠皮肤中的分布(光学显微镜,放大倍数400)。A.对照组(箭头处)中HSP70的表达,显示少量。B.处理组中的HSP70表达(箭头),显示数目增加。C.对照组中β-内啡肽的表达(点箭头),显示少量。D.处理组中β-内啡肽的表达(箭头),显示数目增加。

 

图2.表示热休克蛋白70(HSP70)的角质形成细胞的数量(A)和表达β-内啡肽(B)的角质形成细胞在对照组和刺络放血拔罐疗法的治疗组中的数量。

 

根据免疫组织化学的结果显示HSP70和β-内啡肽的表达在治疗组中呈现棕色的阳性细胞(角质形成细胞)(图1)。HSP70(1A)和β-内啡肽(1C)表达的阴性反应未显示角质形成细胞的深棕色。同时,角质形成细胞的阳性反应为HSP70(图1B)和β-内啡肽(图1D)产生深棕色。

角质形成细胞中阳性细胞的数量显示治疗组中表达HSP70(P <0.001)和β-内啡肽(P <0.001)的细胞数显着高于对照组(图2A和B)

 

热休克蛋白70与β-内啡肽表达的相关性研究

HSP70与β-内啡肽治疗组之间呈正相关(β= 0.864; P <0.001)

 

    疼痛阈值测试

治疗组在刺络放血拔罐治疗后24小时进行疼痛阈值测试,而在CFA注射后72小时在对照组中进行疼痛阈值测试。在治疗组中,大鼠比对照组中的大鼠具有更长的疼痛阈值(P <0.001)(表1)。

 

讨论

 

本研究表明,刺络放血拔罐疗法通过增加疼痛阈值来减轻疼痛。 据我们所知,这是首次在动物实验中证明刺络放血拔罐疗法的这种效果。 我们的治疗组和对照组之间疼痛阈值的差异几乎为50%,这意味着效果相当可观。此外,尽管有报道称在拔罐部位有血肿作为常规轻微不良反应,但我们未发现严重的不良事件。

在当前的研究中,刺络放血拔罐疗法增加了拔罐位点角质形成细胞中β-内啡肽和HSP70的表达。HSP70和β-内啡肽在角质形成细胞中的表达呈正相关。 HSP70是一种伴侣蛋白,可以通过压力上调。刺络放血拔罐疗法产生的负压似乎导致细胞受到应激,并刺激HSP70的表达。此外,在刺络放血拔罐疗法中,在施加负压之前使用刺血针刺穿皮肤,这种治疗导致角质形成细胞的细胞膜受损。 损伤的组织引发炎症反应并释放缓激肽,前列腺素,白三烯,5-羟色胺,组胺和P物质等炎症介质。前列腺素E2的表达刺激HSP70的表达,并且从细胞分泌过量的HSP70。此外,胞外HSP70充当细胞因子并引发CRH的表达。

在哺乳动物中,下丘脑 - 垂体 - 肾上腺(HPA)轴的激活是对压力的主要内分泌反应,这是CRH升高的标志。在促肾上腺皮质激素细胞中,CRH结合CRHR1并刺激POMC基因的转录。 POMC是促肾上腺皮质激素和β-内啡肽的前身。NFkB是与炎症细胞因子如白细胞介素(IL)-1,IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达相关的转录因子。这些细胞因子在炎症状态中高度表达。在促肾上腺皮质激素细胞中诱导NFkB通过CRH激活POMC基因.NFkB还结合POMC基因并刺激POMC的转录。POMC是一种前体蛋白,通过一系列酶促步骤产生不同类型的生物活性肽,包括β-内啡肽。 β-内啡肽被合成并储存在垂体前叶和免疫系统中;它们包括T淋巴细胞,B淋巴细胞,单核细胞和巨噬细胞。在外周神经系统中,β-内啡肽在突触前和突触后神经末梢与阿片受体(特别是mu亚型)结合并发挥镇痛作用。在本研究中,β-内啡肽在角质形成细胞中进行了测定。有趣的是,在角质形成细胞、mRNA和蛋白质水平上都可以检测到β-内啡肽和阿片受体的表达。神经系统角质形成细胞和免疫细胞之间的相互作用由阿片受体系统介导。 尽管如此,这种导致了刺络放血拔罐疗法后疼痛减轻的相互作用需要进一步研究。

刺络放血拔罐疗法的效果似乎是全身性的,因为它能够在热板试验中提高疼痛阈值。疼痛减轻的系统效应可能涉及中枢神经系统。因此,鉴于β-内啡肽和μ-阿片受体也在中枢神经系统中表达,确定其在中枢神经系统中的机制将是有意义的。

目前的研究通过表达HSP70和β-内啡肽,提供了更多关于刺络放血拔罐疗法治疗疼痛的基于证据的数据及其机制。尽管如此,这项研究有一些局限性,其中首要的是刺络放血拔罐疗法仅用于单一治疗(仅在CFA注射后48小时才应用)。因此,开展前瞻性研究以确定较长的影响是有意义的和重要的,因为它们对慢性疼痛患者更为重要。炎症性疼痛是当前研究的模型。因此,确定刺络放血拔罐疗法在神经性疼痛模型中的效果也是有意义的。

 

结论

 

综上所述,本研究显示刺络放血拔罐疗法可缓解疼痛。我们认为这种益处是由HSP70和β-内啡肽表达的上升所介导的。

 

文献来源

 

Imam Subadi,Boya Nugraha,Hening Laswati, et al.Pain Relief with Wet Cupping Therapy in Rats is Mediated by Heat Shock Protein 70 and ß-Endorphin[J].Iran J Med Sci. 2017,42(4): 384–391.

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