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针刺可调节实验性哮喘小鼠中CD4+T细胞亚群的平衡
来源:针灸最前沿 2019-10-16 [科技] [中国中医药]

摘要

目的:评价不同CD4+T细胞亚群在实验性哮喘小鼠中针刺平喘的作用。

 

方法:用卵清蛋白(OVA)激发BALB/c小鼠建立实验性哮喘模型。将小鼠按随机数字表分成4组,包括正常对照组、哮喘模型组、针刺组和假针刺组(每组14只)。取大椎、双侧风门、肺俞为穴位,每隔一日行针刺手法,连续治疗4周。假针刺组为环跳(GB30)。用Buxco肺系统检测气道高反应性。通过苏木精-伊红染色和高碘酸-施氏染色对炎症细胞浸润和粘液高分泌进行肺组织病理学分析。用酶联免疫吸附法(ELISA)和Bio-Plex法检测血清中炎症介质的含量。用流式细胞术和Western blot分析肺组织中CD4+T细胞亚群,包括T淋巴细胞极化重要因子的表达水平。使用Western blot检测相关通路。

结果:与OVA哮喘模型组相比,针刺能减轻气道高反应性,抑制炎症细胞浸润和粘液高分泌(P<0.05或P<0.01)。此外,针刺可增加T-bet和Foxp3+的表达,增加肺组织中CD4+干扰素γ(IFN-γ+)和CD4+、Foxp3+细胞数以及血清中Treg型细胞因子白细胞介素(IL)-10的水平(P<0.0 5或P<0.0 1)。同时,针刺降低RAR相关孤儿受体γt(RORγt)水平,降低CD4+、IL-17A+细胞数,降低血清IL-5、IL-13和IL-17A水平(P<0.0 5或P<0.0 1)。此外,针刺和假针刺均可抑制p38和p44/42的磷酸化(P<0.01)。

 

结论:针刺可通过增强Th1和Treg的活性来减轻过敏性气道炎症,从而调节实验性哮喘小鼠CD4+T细胞亚群的平衡。

相关介绍

哮喘是一种病理生理复杂的常见病。

人们普遍认为,许多免疫细胞,特别是活化的T细胞亚型,释放细胞因子,共同作用,导致哮喘的主要症状。Th2细胞及相关细胞因子诱导EOS气道炎症和IgE合成,参与哮喘的发病过程,Th1细胞和干扰素γ(IFN-γ)可抑制这种病理过程。Th17细胞及相关细胞因子引起中性粒细胞浸润,而Treg可释放Foxp3并抑制γ相关的受体γt(rOR,t),从而终止Th17细胞的分化。提示这些细胞的活动与哮喘的病理和治疗效果有关。

 

p38和p44/42丝裂原活化蛋白激酶。

p38和p44/42作为丝裂原活化蛋白激酶家族的重要组成部分,不仅在炎症和应激反应中起重要作用,而且还参与细胞的存活、分化和凋亡过程。以前的研究表明,p38和p42/44通过对炎症信号的反应在哮喘中被激活。p38和p42/44也参与了嗜酸性粒细胞的分化和细胞因子的产生,提示它们可能参与哮喘T细胞的极化。

 

Buxco Pulse System

气道反应性的测量是在最后一次干预后进行的。小鼠在戊巴比妥钠麻醉下吸入梯度剂量的MCH(3.125,6.2 5和12.5 mg/mL),使用Buxco Pulse System(Buxco Electronics,Troy,NY,USA)评估肺阻力(RL)和肺动态顺应性(Cdyn)。

 

Western Blot分析

按说明完成各组肺总蛋白的提取。用20μg蛋白进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳,然后将T-bet、GATA3、Foxp3、rORγt、p38、p-p38、p44/42和p-p44/42等靶蛋白转移到聚偏氟乙烯膜上封闭。此后,使用特异性抗体和HRP结合的二级抗体以1:10000稀释度对靶蛋白进行印迹。结果用美国Bio-Rad Image Lab软件3.0进行量化。

针刺对哮喘小鼠AHR的影响

 

针刺对哮喘小鼠炎症反应的影响

 

针刺对哮喘小鼠肺组织p38和p44/42磷酸化的影响

 

针刺对哮喘小鼠肺组织CD4+T细胞亚群的影响

 

 

总结

     在本实验中,针刺可通过增加RL和降低Cdyn、气道炎症、粘液高分泌来减轻实验性哮喘模型的AHR。此外,针刺治疗同时促进Th1和Treg活性。Treg细胞可以通过增加IL-10来抑制哮喘特征并驱动哮喘的外周耐受性。针刺可以将哮喘模型从Th2和Th17为主的反应转变为Th1和Treg反应,从而合理地减轻哮喘症状。

     此外,我们观察到针刺和假针刺都可以降低p-p38和p-p44/42的水平,表明特异性和非特异性效应都有助于抑制p38和p44/42的活性。

     本研究表明针刺可以通过增强Th1和Treg活性以及调节CD4+T细胞亚群的平衡来减轻实验性哮喘小鼠的哮喘症状。

 

文献来源:Dong M, Wang W Q,Chen J,et al.

Acupuncture Regulates the Balance of CD4+ T Cell Subtypes in Experimental Asthma Mice.  Chin J Integr Med. 2019 Aug;25(8):617-624.

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